大肠杆菌ET12567(pUZ8002) 是由T. MacNeil在GM2929菌株基础上改建的、主要用来进行大肠杆菌-链霉菌种间基因转移的菌株,它有下列特点:
1. 携带pUZ8002伴侣质粒,此质粒的tra基因编码转移蛋白Tra,后者可使在同一细胞中携带野生型oriT的质粒(如pSET152)能够通过结合转移到链霉菌中。pUZ8002自身的oriT(来于RK2质粒)为突变型,其转移效率比野生型低1000倍,故基本不发生转移。
2. 跟ET12567(pUZ8002)兼容的质粒常见的是pSET152和pKC1139。
3. 甲基化缺陷比GM2929菌株更彻底,故其转移出的非甲基化质粒DNA不会被链霉受体菌的甲基化依赖型修饰限制系统降解。如果链霉菌受体菌不含甲基化依赖型修饰限制系统,则也可以使用DH5a(pUZ8002)菌作为供体菌。
4. 培养时需要加入25 mg/mL氯霉素和25 mg/mL卡那霉素以维持细胞内pUZ8002伴侣质粒的存在。
5. 本菌株其他基因型和表现型见下表:
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基因型 |
表现型 |
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F- |
不携带F质粒 |
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ara-14 |
阿拉伯糖异构酶失活,不能利用阿拉伯糖 |
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dam-13::Tn9 |
dam-13含转座子Tn9插入,Tn9具氯霉素抗性,dam插入失活导致不能对GATC中的A甲基化 |
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dcm-6 |
dcm修饰限制系统的胞嘧啶甲基化酶失活,不能甲基化CCWGG的第二个C |
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galK2 |
半乳糖激酶失活,不能利用半乳糖,2脱氧半乳糖抗性 |
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galT22 |
半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶失活,不能利用半乳糖,2脱氧半乳糖抗性 |
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glnV44 |
同supE,使琥珀终止子编码谷氨酰胺 |
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hisG4 |
不能合成组氨酸 |
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hsdM |
EcoK修饰限制系统的腺嘌呤甲基化酶失活 |
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hsdR |
EcoK修饰限制系统的限制性内切酶失活 |
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lacY1 |
半乳糖苷通透酶突变,不能利用乳糖 |
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leuB6 |
b-异丙基苹果酸脱氢酶失活,不能合成亮氨酸 |
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mtl-1 |
不能利用甘露醇 |
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recF143 |
recF重组途径缺失,降低质粒间的重组 |
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rpsL136 |
30S核糖体S12突变,导致对链霉素抗性 |
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thi-1 |
不能合成硫氨(维生素B1) |
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tonA31 |
外膜蛋白突变,抗T1、T5、f80噬菌体感染 |
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tsx-78 |
外膜蛋白突变,抗T6噬菌体感染和大肠杆菌毒素K |
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xyl-5 |
不能利用木糖 |
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zjj-202::Tn10 |
Zjj-202含Tn10插入,有四环素抗性 |