对dsDNA进行准确定量是很多重要的分子生物学实验的前提。不同的定量方法有不同的线性范围和检测灵敏度,对干扰的屏蔽能力也各不相同。其中, OD260测定法操作最简单,但灵敏度只有5 μg/mL,不能屏蔽单链DNA、RNA和核苷酸的干扰。为此本公司开发了基于Hoechst 33258荧光染料的dsDNA定量产品,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户不需要单独摸索最佳条件。
2. 操作简单,只需要将Hoechst 33258工作液与待测样品混合即可。
3. 彻底屏蔽RNA的干扰,同样浓度RNA产生的荧光不超过DNA的1%,尤其适用于直接用细胞裂解液测定DNA浓度(此时有大量RNA存在)。
4. 能部分屏蔽单链DNA的干扰。Hoechst 33258荧光染料与单链DNA结合时发出的荧光并不会与单链DNA浓度成比例。
5. 需要激发波长为365 nm,发射波长为458 nm的荧光仪。
6. 可选用比色皿检测模式,也可选用多孔板检测模式。
7. 灵敏度比OD260测定法高500倍,为10 ng/mL。
8. 线性范围为10 ng/mL-10 μg/mL(相当于10 pg/μL-10 ng/μL)。
9. Hoechst 33258染料对dsDNA具有高度选择性,主要识别AT区。
10. 提供dsDNA定量对照,用于制备标准曲线。dsDNA定量对照AT含量为59%。
11. 本产品足够100次100 μL体系的测定,每次用10 μL样品。
12. 本产品只能用于科研。