cDNA第二链合成试剂盒的起始材料是已经完成第一链cDNA合成的RNA-DNA杂交链。其原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链,其示意图如下:
本产品具有下列特点:
1. 即开即用,含有合成cDNA第二链的所有试剂,包括RNase H、E.coli DNA聚合酶1和DNA连接酶。
2. 一管式操作,不需要每次进行纯化,不丢失宝贵的样品。
3. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
4. 本试剂盒足够10次80 μL体系的cDNA第二链合成反应。