RNA定量最常见的方法是测量260 nm光吸收,但其缺点是灵敏度较低,不适用于浓度低于4 μg/mL的RNA溶液。此外,此法容易被干扰,因为DNA、蛋白和游离核苷酸均在260 nm有光吸收。为解决这些问题,本公司开发了基于RiboGreen染料的RNA定量试剂盒,其原理是游离的RiboGreen几乎不产生荧光,但与RNA结合后会在Ex500 nm/Em525 nm下产生荧光,并且荧光强度跟RNA浓度成线性关系,因此可以通过检测荧光强度并结合标准曲线来对RNA进行定量。本产品具有下列特点:
1. 即开即用,用户不需要优化条件。
2. 灵敏度可达1 ng/mL,比基于溴化乙锭的定量法灵敏200倍,比测OD260的方法灵敏1000倍。
3. 线性检测范围宽,高浓度RiboGreen工作液检测范围为25 ng/mL-500 ng/mL,低浓度RiboGreen工作液检测范围为1 ng/mL-50 ng/mL,合计线性范围达2.5个数量级以上。
4. 提供RNA标准品,用于制作标准曲线。
5. 抗核苷酸、盐类、尿素、乙醇、氯仿、表面活性剂、蛋白和琼脂糖干扰。但不能抗DNA干扰,故用户需先除去样本中的DNA。
6. 跟荧光酶标仪、标准的荧光光度计或滤光荧光计兼容。
7. 按照2 mL的反应体系来算,本产品足够50次高RiboGreen浓度检测,足够500次低RiboGreen浓度检测。
8. 本产品只能用于科研。