天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂产品图片
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天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂

英文名:Skygen Inhibitor of Residual Reverse Transcription Activity of DNA Polymerase
产品编号:240316
保存温度:-20℃
运输温度:Cold
货号 规格 货期 目录价
240316 1 mL 现货

产品内容

本产品用于在PERT实验中抑制DNA聚合酶残留的逆转录活性。PERT实验是一种用于检测逆转录活性的非常灵敏的方法,但样本中很多时候同时还含有DNA聚合酶,尤其是细胞裂解液和细胞培养上清这类样本,而原核生物的很多DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)和真核生物的DNA聚合酶都有残留的逆转录活性,这些活性会极大增加背景信号,使得阴性对照也会出现阳性结果,严重干扰实验的进行。为此本公司开发了本产品,它具有下列特点:

1.     即开即用,按一定比例加入到PERT反应体系中即可。

2.     只抑制DNA聚合酶的逆转录活性,不抑制绝大部分逆转录酶的逆转录活性。

3.     适用于所有种类的DNA聚合酶。

4.     本产品对每种DNA聚合酶的逆转录活性的抑制效果各不相同,一般都在10倍左右,即能使Ct增加3左右。

5.     本产品1 mL规格足够500次20 μL体系的PERT反应。

6.     本产品只能用于科研。

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常见问题

Q1: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂的活性单位是如何定义的?
A1: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂的一个酶活性单位(U)指在推荐缓冲液与温度(通常 37℃)下,1 小时内完全消化 1 μg 底物 DNA 中特定识别位点所需的酶量。可据此结合待消化底物的预估位点数量估算实验用量。

Q2: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂反应要用什么缓冲液?
A2: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂在厂家提供的专用缓冲液中具有最佳活性,标准单酶切反应条件为 37℃ 温育 1 小时。请严格遵循说明书建议的缓冲体系与温度时间,避免可能的星号活性。该酶与多数常见分子试剂兼容。

Q3: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂切完怎么终止反应?
A3: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂通常可通过 65℃ 加热 20 分钟实现热失活,便于后续连接、转化等下游实验。具体条件以说明书为准;若下游对酶残留敏感,也可采用纯化柱回收 DNA 片段。

Q4: 什么是“星号活性”?如何避免?
A4: 星号活性指酶在非最优条件(甘油过高、离子强度不适、pH 偏差或酶过量)下切割非典型序列的现象。请控制反应体系甘油浓度不超过 5%、使用推荐缓冲液、避免过量加酶、在准确温度下反应。

Q5: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂如何运输和保存?
A5: 天净沙DNA聚合酶残留RT活性抑制剂应于 -20℃ 冷冻保存与运输,酶液通常含 50% 甘油缓冲液以防冻结。日常请冰上操作、用后立即放回 -20℃,以维持其长期稳定性与活性。