10×耐热DNA聚合酶缓冲液产品图片
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10×耐热DNA聚合酶缓冲液

英文名:10× Thermopolymerase Buffer
产品编号:6-3427
保存温度:-20℃
运输温度:低温
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6-3427 250 mL 现货

产品内容

    本产品是10×耐热聚合酶反应缓冲液(10× Thermopolymerase Buffer),其配方是:200 mM Tris-HCl(pH 8.8),100 mM (NH4)2SO4,100 mM KCl,2 mM MgSO4,0.1% Triton X-100。10×耐热聚合酶反应缓冲液跟多数耐热DNA聚合酶(包括Taq DNA聚合酶)或DNA修饰酶兼容,使得多种反应可以在一个体系里面完成,但最适Mg2+浓度可能需要自行优化。本产品只能用于科研。

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常见问题

Q1: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液的活性单位是如何定义的?
A1: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液的一个酶活性单位(U)指在推荐缓冲液与温度(通常 37℃)下,1 小时内完全消化 1 μg 底物 DNA 中特定识别位点所需的酶量。可据此结合待消化底物的预估位点数量估算实验用量。

Q2: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液反应要用什么缓冲液?
A2: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液在厂家提供的专用缓冲液中具有最佳活性,标准单酶切反应条件为 37℃ 温育 1 小时。请严格遵循说明书建议的缓冲体系与温度时间,避免可能的星号活性。该酶与多数常见分子试剂兼容。

Q3: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液切完怎么终止反应?
A3: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液通常可通过 65℃ 加热 20 分钟实现热失活,便于后续连接、转化等下游实验。具体条件以说明书为准;若下游对酶残留敏感,也可采用纯化柱回收 DNA 片段。

Q4: 什么是“星号活性”?如何避免?
A4: 星号活性指酶在非最优条件(甘油过高、离子强度不适、pH 偏差或酶过量)下切割非典型序列的现象。请控制反应体系甘油浓度不超过 5%、使用推荐缓冲液、避免过量加酶、在准确温度下反应。

Q5: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液如何运输和保存?
A5: 10×耐热DNA聚合酶缓冲液应于 -20℃ 冷冻保存与运输,酶液通常含 50% 甘油缓冲液以防冻结。日常请冰上操作、用后立即放回 -20℃,以维持其长期稳定性与活性。