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本酶催化的反应为5A,11a-Dehydrotetracycline + NADPH + H+ + O2 = 5A,11a-Dehydrooxytetracycline + NADP+ + H2O，系统名称为5A,11a-Dehydrotetracycline,NADPH:oxygen Oxidoreductase (5-Hydroxylating)，该酶已从细菌龟裂链霉菌 Streptomyces rimosus 中得到表征，是双功能的，催化两个连续的单加氧反应。它先催化脱水四环素C-6位的立体专一羟化（EC 1.14.13.38）。如果释放的产物被 EC 1.3.98.4，5a,11a-脱氢四环素脱氢酶（OxyR）捕获，则被还原为四环素。但如果释放的产物被OxyS重新捕获，则再进行一次C-5位羟化，生成5a,11a-脱氢氧四环素，后者经OxyR作用成为土霉素。
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