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本酶催化的反应为Cholesterol + Reduced Acceptor + O2 = 25-Hydroxycholesterol + Acceptor + H2O,系统名称为Cholesterol,hydrogen-Donor:oxygen Oxidoreductase (25-Hydroxylating),与大多数其他甾醇羟化酶不同,该酶不是细胞色素P-450。相反,它使用双铁辅因子催化疏水底物的羟基化 [1]。双铁辅因子可以是Fe-O-Fe或Fe-OH-Fe,并通过与成簇的组氨酸或谷氨酸残基的相互作用结合到酶上 [4,5]。在细胞培养中,该酶下调胆固醇合成和甾醇调节元件结合蛋白(SREBPs)的加工。参见EC 1.17.99.10(胆固醇C-25羟化酶)。