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本酶催化的反应为(25R)-3alpha,7alpha,12alpha-Trihydroxy-5beta-Cholestan-26-Oyl-CoA + H2O + Acceptor = (24R,25R)-3alpha,7alpha,12alpha,24-Tetrahydroxy-5beta-Cholestan-26-Oyl-CoA + Reduced Acceptor，系统名称为(25R)-3alpha,7alpha,12alpha-Trihydroxy-5beta-Cholestan-26-Oyl-CoA:acceptor 24-Oxidoreductase (24R-Hydroxylating)，需要ATP。哺乳动物中的反应可能涉及脱氢形成24(25)-双键，随后水合 [1]。然而，在东方铃蟾（Bombina orientalis）等两栖动物中，产物可能是通过(25R)-3α,7α,12α-三羟基-5β-胆甾烷-26-酸饱和侧链的直接羟基化形成的，而不是通过24(25)双键的水合 [5]。在微粒体中，游离酸优于辅酶A酯，而在线粒体中，辅酶A酯优于底物的游离酸形式 [1]。
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