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本酶催化的反应为5-Methyltetrahydrofolate + NAD(P)+ = 5,10-Methylenetetrahydrofolate + NAD(P)H + H+，系统名称为5-Methyltetrahydrofolate:NAD(P)+ Oxidoreductase，黄素蛋白（FAD）。该酶催化5,10-亚甲基四氢叶酸可逆转化为5-甲基四氢叶酸，通过调节一碳基团在细胞甲基化反应和核酸合成之间的分配，在叶酸代谢中起重要作用。该酶从利什曼原虫属（Leishmania）原生动物寄生虫中鉴定，在已鉴定的类似真核酶中独一无二，因为它缺乏C端变构调节结构域（使其能够催化可逆反应），并在生理条件下以相同效率使用NADH和NADPH。参见 EC 1.5.1.53（亚甲基四氢叶酸还原酶（NADPH））、EC 1.5.1.54（亚甲基四氢叶酸还原酶（NADH））和 EC 1.5.7.1（亚甲基四氢叶酸还原酶（铁氧还蛋白））。
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