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本酶催化的反应为[Elongator TRNAMet]-Cytidine34 + ATP + Acetyl-CoA + H2O = CoA + [Elongator TRNAMet]-N4-Acetylcytidine34 + ADP + Phosphate，系统名称为Acetyl-CoA:[elongator TRNAMet]-Cytidine34 N4-Acetyltransferase (ATP-Hydrolysing)，该酶乙酰化延伸特异性 tRNAMet 的 CAU 反密码子的摆动碱基胞苷34。大肠杆菌 Escherichia coli 的 TmcA 严格区分延伸 tRNAMet 与 tRNAIle（后者结构相似且具有相同的反密码子环），主要是通过识别反密码子茎中的 C27-G43 碱基对。该酶可以用 GTP 代替 ATP 来形成 N4-乙酰胞苷 [1]。
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