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本酶催化的反应为[E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-L-Lysine = [E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-N6-Ubiquitinyl-L-Lysine (Overall Reaction);;(1a) [E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine + [RBR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-L-Cysteine = [E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-L-Cysteine + [RBR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine;;(1b) [RBR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-L-Lysine = [RBR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-N6-Ubiquitinyl-L-Lysine，系统名称为[E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine:acceptor Protein Ubiquitin Transferase (Isopeptide Bond-Forming; RBR-Type)，RBR 型 E3 泛素转移酶具有两个 RING 指状结构，由一个内部基序（IBR，In Between RING）隔开。该酶与由某些 RING 型 E3 泛素转移酶形成的 CRL（Cullin-RING 泛素连接酶）复合物相互作用（见 EC 2.3.2.27），后者包括一个 NEDD8 化的 cullin 骨架蛋白和一个底物识别模块。RING1 结构域结合一个 EC 2.3.2.23（E2 泛素结合酶），并将结合在其上的泛素转移到 RING2 结构域内部的半胱氨酸残基上，随后泛素从 RING2 转移到底物上 [4]。底物被 RBR 型连接酶泛素化后，可利用直接携带在 E2 酶上的泛素，经 EC 2.3.2.27 催化的反应进一步泛素化。RBR 型酶的活性依赖于 CRL 复合物中 cullin 蛋白的 NEDD8 化 [2,4]。参见 EC 2.3.2.26（HECT 型 E3 泛素转移酶）、EC 2.3.2.27（RING 型 E3 泛素转移酶）和 EC 2.3.2.32（cullin-RING 型 E3 NEDD8 转移酶）。
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