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本酶催化的反应为[E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-L-Threonine = [E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-3-O-Ubiquitinyl-L-Threonine (Overall Reaction);;(1a) [E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine + [RCR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-L-Cysteine = [E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-L-Cysteine + [RCR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine;;(1b) [RCR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-L-Threonine = [RCR-Type E3 Ubiquitin Transferase]-L-Cysteine + [Acceptor Protein]-3-O-Ubiquitinyl-L-Threonine，系统名称为[E2 Ubiquitin-Conjugating Enzyme]-S-Ubiquitinyl-L-Cysteine:acceptor Protein Ubiquitin Transferase (Isopeptide Bond-Forming; RCR-Type)，RCR 型 E3 泛素转移酶是一类 RING 型 E3 泛素转移酶（参见 EC 2.3.2.27），通过内部半胱氨酸残基介导受体蛋白的泛素化。RING1 结构域结合一个 EC 2.3.2.23（E2 泛素缀合酶），并将其结合的泛素转移到 RCR 型连接酶介导环上的内部半胱氨酸残基。在泛素从 RCR 型连接酶转移到底物之前，泛素可能先被转移到第二个内部半胱氨酸。
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