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本酶催化的反应为ATP + Riboflavin = ADP + FMN,系统名称为ATP:riboflavin 5'-Phosphotransferase,辅因子 FMN 和 FAD 参与所有生物中的众多过程,包括线粒体电子传递、光合作用、脂肪酸氧化以及维生素 B6、维生素 B12 和叶酸的代谢 [5]。虽然单功能核黄素激酶存在于真核生物中,但一些细菌具有同时表现出该活性和 EC 2.7.7.2(FMN 腺苷酰转移酶)活性的双功能酶 [5]。活性需要二价金属阳离子(不同物种偏好 Mg2+、Mn2+ 或 Zn2+)。在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中,ATP 可被其他磷酸供体替代,但酶活性按 ATP > dATP > CTP > UTP 的顺序递减 [6]。