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本酶催化的反应为ATP + [TtuB Sulfur-Carrier Protein]-Gly-NH-CH2-C(O)SH + 5-Methyluracil54 In TRNA + H2O = AMP + Diphosphate + 5-Methyl-2-Thiouracil54 In TRNA + [TtuB Sulfur-Carrier Protein]-Gly-Gly，系统名称为[TtuB Sulfur-Carrier Protein]-Gly-NH-CH2-C(O)SH:tRNA (5-Methyluridine54-2-O)-Sulfurtransferase，该酶存在于嗜热细菌和古菌中，修饰 tRNA 第 54 位上的核糖胸腺嘧啶核苷（5-甲基尿苷）残基。含有锌和一个 [4Fe-4S] 簇。某些生物（如古菌堀越火球菌 Pyrococcus horikoshii）没有 TtuB 硫载体蛋白，似乎使用硫化物作为硫源。
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