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本酶催化的反应为N6-(3-Methylbut-2-En-1-Yl)-Adenine37 In TRNA + A [3Fe-4S] Iron-Sulfur Cluster + 2 S-Adenosyl-L-Methionine + Reduced Electron Acceptor = N6-(3-Methylbut-2-En-1-Yl)-2-(Methylsulfanyl)adenine37 In TRNA + S-Adenosyl-L-Homocysteine + A [3Fe-3S] Iron-Sulfur Cluster + L-Methionine + 5'-Deoxyadenine + Electron Acceptor，系统名称为TRNA N6-(3-Methylbut-2-En-1-Yl)-Adenine37:[3Fe-4S] Iron-Sulfur Cluster,S-Adenosyl-L-Methionine C2-(Methylsulfanyl)transferase，该酶属于AdoMet自由基（radical SAM）家族。它含有一个 [4Fe-4S] 簇（主簇）和一个 [3Fe-4S] 簇（辅助簇）。据认为该反应分两步进行：第一步，一分子SAM用于甲基化辅助簇的桥连μ-硫离子，形成硫甲基基团；第二步，第二分子SAM被断裂为5'-脱氧腺苷5'-自由基，后者夺取底物C2的氢，硫甲基基团从辅助簇转移到tRNA底物中被自由基活化的碳上。辅助簇留在无活性的 [3Fe-3S] 状态，必须经过修复或更换，该酶才能催化下一轮反应。
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