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本酶催化的反应为(R)-2-Hydroxybutane-1,2,4-Tricarboxylate = (1R,2S)-1-Hydroxybutane-1,2,4-Tricarboxylate (Overall Reaction);;(1a) (R)-2-Hydroxybutane-1,2,4-Tricarboxylate = (Z)-But-1-Ene-1,2,4-Tricarboxylate + H2O;;(1b) (Z)-But-1-Ene-1,2,4-Tricarboxylate + H2O = (1R,2S)-1-Hydroxybutane-1,2,4-Tricarboxylate，系统名称为(R)-2-Hydroxybutane-1,2,4-Tricarboxylate Hydro-Lyase [(1R,2S)-1-Hydroxybutane-1,2,4-Tricarboxylate-Forming]，该酶催化产甲烷古菌辅酶 B 生物合成途径中的几个反应。需要一个 [4Fe-4S] 簇才有活性。与 EC 4.2.1.36 高柠檬酸水合酶不同，该酶既能催化 (R)-高柠檬酸脱水生成顺式高乌头酸，又能催化随后生成高异柠檬酸的水合反应。除顺式高乌头酸外，该酶还能催化生理底物二高乌头酸和三高乌头酸以及非生理底物四高乌头酸的水合。顺乌头酸和苏式-DL-异柠檬酸不能作为底物，(S)-高柠檬酸和反式高乌头酸则充当该酶的抑制剂。
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