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本酶催化的反应为N ATP + N H2O + Wound RNA = N ADP + N Phosphate + Unwound RNA，系统名称为RNA 5'-3' Helicase (ATP-Hydrolysing)，RNA 解旋酶参与 RNA 代谢的几乎所有方面，利用 ATP 水解的能量解开 RNA。解旋酶的引擎核心通常由一对 RecA 样结构域组成，在其界面处形成 NTP 结合裂口。NTP 结合裂口化学状态的变化（NTP 或其水解产物的结合）改变 RecA 样结构域和核酸结合结构域的相对位置，产生破坏核酸配对的结构运动，导致分离和解旋。大多数 RNA 解旋酶利用称为经典双链解旋的机制，其中解旋酶结合与双链区相邻的单链区域，然后以确定的方向性沿着结合链移位，置换互补链。大多数此类解旋酶沿 3' 到 5' 方向进行（A 型极性 - 参见 EC 5.6.2.6，RNA 3'-5' 解旋酶），但有些沿 5' 到 3' 方向进行（B 型极性），还有些能够催化任一方向的解旋 [1,4]。大多数经典运作的解旋酶需要底物具有相对于双链区确定取向（极性）的单链区域。另一类 RNA 解旋酶，EC 5.6.2.7，DEAD-box RNA 解旋酶，使用不同的机制，在没有移位的情况下解开短段 RNA。
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