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本酶催化的反应为ATP + L-Aspartate + TRNAAsx = AMP + Diphosphate + L-Aspartyl-TRNAAsx，系统名称为L-Aspartate:tRNAAsx Ligase (AMP-Forming)，当该酶作用于tRNAAsp时，它催化与EC 6.1.1.12，天冬氨酸---tRNA连接酶相同的反应。然而，它的辨别能力降低，因此也能形成天冬氨酰-tRNAAsn。已发现这种特异性的放宽是由于tRNA中特异识别反密码子第三位的环缺失所致[1]。这解释了例如嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）中该酶既能识别tRNAAsp（GUC反密码子）又能识别tRNAAsn（GUU反密码子）的能力。天冬氨酰-tRNAAsn在被EC 6.3.5.6，天冬酰胺酰-tRNA合酶（谷氨酰胺水解型）转化为天冬酰胺酰-tRNAAsn之前不用于蛋白质合成。
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