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本酶催化的反应为ATP + L-Lysine + TRNAPyl = AMP + Diphosphate + L-Lysyl-TRNAPyl,系统名称为L-Lysine:tRNAPyl Ligase (AMP-Forming),在将修饰氨基酸吡咯赖氨酸(Pyl)掺入某些甲胺甲基转移酶的生物(如巴氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina barkeri))中,一种具有CUA反密码子的不寻常tRNAPyl被这种II类氨酰---tRNA连接酶装载赖氨酸。该tRNA和连接酶编码于同一基因簇内,且该连接酶似乎与EC 6.1.1.6,赖氨酸---tRNA连接酶关系不密切。