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本酶催化的反应为ATP + L-Firefly Luciferin + CoA = AMP + Diphosphate + L-Firefly Luciferyl-CoA，系统名称为(R)-4,5-Dihydro-2-(6-Hydroxy-1,3-Benzothiazol-2-Yl)thiazole-4-Carboxylate:CoA Ligase (AMP-Forming)，这是萤火虫荧光素酶（EC 1.13.12.7）的一种替代活性，该酶在正常条件下仅在作用于底物的 L-对映异构体时才表现出此活性。D-异构体仅在体外低氧条件下才能作为 CoA 连接酶活性的底物，这种条件在体内并不存在。将 L-萤火虫荧光素活化为 CoA 酯是使其差向异构化为 D-对映异构体的循环途径中的一个步骤，而 D-对映异构体是唯一经氧化发光的底物。
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