本产品是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒,标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成,可用下面的示意图表示:
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本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良,具有下列特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已标记DNA探针不会被酶降解,探针产量更高。
3. 快速,最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素,可以达到1E9 cpm/μg DNA)。
5. 所需模版DNA量少,模板可以是线状或环状的、也可以是单链或双链的,但长度必须在100 bp以上。
6. 得到的探针长度一般在200-400 nt之间(如果模板长度在1 kb以上),可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 本产品足够5次标记实验。
8. 本产品只能用于科研。
