天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL产品图片
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天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL

英文名:Skygen Tth DNA Ligase 5 U/μL
别名:P26996
产品编号:240336
保存温度:-20℃
运输温度:Cold
货号 规格 货期 目录价
240336 250 U 1-3 Days

产品内容

    本产品是5 U/μL的Tth DNA连接酶,分离自携带嗜热栖热菌DNA连接酶基因的质粒的大肠杆菌菌株,它具有以下特点:
1.    该酶能催化双链DNA中相邻3’羟基和5’-磷酸末端之间依赖NAD的磷酸二酯键形成。
2.    对单链DNA或RNA以及平端DNA没有活性。
3.    该酶活性定义为:1个单位的Tth DNA连接酶可在45℃下1分钟内催化1 μg噬菌体Lambda DNA中存在的50% cos位点的连接。
4.    本产品只适用于科研。 

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常见问题

Q1: 天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL的活性单位是如何定义的?
A1: 天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL的一个酶活性单位(U)指在推荐缓冲液与温度(通常 37℃)下,1 小时内完全消化 1 μg 底物 DNA 中特定识别位点所需的酶量。可据此结合待消化底物的预估位点数量估算实验用量。

Q2: 天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL的最佳反应条件是什么?需要使用特定缓冲液吗?
A2: 天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL在厂家提供的专用缓冲液中具有最佳活性,标准单酶切反应条件为 37℃ 温育 1 小时。请严格遵循说明书建议的缓冲体系与温度时间,避免可能的星号活性。该酶与多数常见分子试剂兼容。

Q3: 酶切反应完成后是否需要热失活?
A3: 天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL通常可通过 65℃ 加热 20 分钟实现热失活,便于后续连接、转化等下游实验。具体条件以说明书为准;若下游对酶残留敏感,也可采用纯化柱回收 DNA 片段。

Q4: 什么是“星号活性”?如何避免?
A4: 星号活性指酶在非最优条件(甘油过高、离子强度不适、pH 偏差或酶过量)下切割非典型序列的现象。请控制反应体系甘油浓度不超过 5%、使用推荐缓冲液、避免过量加酶、在准确温度下反应。

Q5: 天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL平时怎么存放?
A5: 天净沙Tth DNA连接酶 5 U/μL应于 -20℃ 冷冻保存与运输,酶液通常含 50% 甘油缓冲液以防冻结。日常请冰上操作、用后立即放回 -20℃,以维持其长期稳定性与活性。